蛋白表达的相关研究中可以看到离心机起到了重要作用。

　　体外重组蛋白表达有四大系统：大肠杆菌表达系统，哺乳动物细胞表达，酵母表达系统及昆虫细胞表达。

　　今天我们要详细讲一下大肠杆菌表达系统。

　　先从大肠杆菌表达系统步骤了解：

　　不包括基因构建等上游操作和蛋白纯化部分。基因构建参考密码子优化，蛋白纯化参考蛋白纯化专题。以下内容主要包括蛋白表达鉴定：

　　表达鉴定第一天的任务，常用抗性选择根据感受态细胞选择拿到质粒，实验室离心机离心（3000r/min；2min）在质粒中加入TE（使质粒最终加入到110μL感受态细胞中的量为80-100ng，据此确定加入TE的量），一般为（1μg质粒加20μLTE；2μg质粒加50μLTE；5μg质粒加100μL TE）将质粒与TE混匀，加入2μL混液于感受态细胞中将感受态细胞放入冰箱（4℃）中，30min取出后立即放入水浴锅中（42℃），热激90s,再次放入冰箱（4℃）中，3min拿出后取200μL的LB液体培养基加入到已转入质粒的感受态细胞中放入摇床（37℃;  195r）中,  30nim至60min; （最佳45min）取出离心（3000r/min；2min）去掉200μL的上清，留100μL左右上清悬浮沉淀，吸取50μL悬液涂平板，（先将对应抗性的平板放入培养箱（37℃）中预热20min）把平板放入培养箱（37℃），过夜（12h至16h）。

　　其次是表达鉴定第二天的任务,注意Pcold的表达温度：

　　每个平板挑取单菌落至4支对应抗性的L（4ml）试管中，编号为“0”“1”“2”“3”。

　　将试管放入摇床（37℃；195r）中，（单抗3h左右；双抗4左右；刚开始用可见分光光度计测OD值；熟练后可目测（背光下，以试管中的枪头为例，刚刚看不见枪头即可）），测OD值（0.6至0.8）。

　　从“0”号管中取700μL悬液加入到100μL（C=80%）的保种甘油中，震匀，放入冰箱（-20℃）冻存。

　　在每组菌的“1”“2”“3”号试管中分别加入2μL的IPTG（终浓度0.5mM最适）。

　　视不同的载体选择适合的表达环境（PET/PGEX：15℃表达过夜；25℃表达6h；37℃表达3h至4h（4支试管，“0”“1”号试管15℃表达过夜；“2”“3”试管37℃表达3h至4h）。Pcold：全部15℃表达过夜）。

　　最后是表达鉴定第三天，全菌的表达鉴定分析，注意控制溶质的量及溶液黏度：

　　从每组4支的试管中均取500μL菌液加入到1.5ml离心管中，（若OD值不一样，值小的可多取）离心（6000r/min），5min, 去上清，留沉淀（沉淀少的，可再取菌液离心，尽量使沉淀量接近）。

　　在每个离心管中加入500μL的DDH2O,悬浮沉淀，离心（6000r/min），5min, 去上清，留沉淀。

　　在每支离心管中加入45μL的1×PBS和45μL的2×Loading Buffer悬浮沉淀（当溶质适量且均一的情况下，加入量不变；当溶质多且粘稠时，应使加入量增大，为降低粘度也可减少上液量）。

　　放入煮样器（100℃） 25min。

　　取出后离心（6000r/min)  3min,  电泳检测。

　　从上述详细步骤可以看出实验室离心机在整个过程中都不能缺席。