离心机在质粒DNA提取中有着很重要的地位，而且操作流程复杂。

　　因为质粒DNA作为基因重组与基因转移的载体，在遗传工程研究中很重要。

　　所以在日常的细胞实验中经常会用到质粒DNA，现在都用剂盒非常方便，而且菌体培养后，可以多管浓缩提取，提到的质粒量多，可以-20℃保存，以后用于酶切、转化等实验，可以提前跑个胶，只要不降解，就可以继续用，避免每次要用，都要培养一遍再提取一遍。

　　质粒DNA常见的提取方式分为两种：

　　一.质粒小提

　　将之前准备的LB液体培养基中加入抗性(氨苄1：1000)，取15ml 离心管，加入5ml 已加入抗性的液体培养基。

　　用小白Tips从平板中挑选单克隆，将小枪头打入15ml 离心管中，30℃，180rpm，摇 >5h，以看到液体培养基变浑浊为准。

　　取干净的1.5ml EP管，从15ml 离心管中吸取1.5ml(这个量可根据菌液混浊程度加减)菌液，离心机12000rpm，离心3min。

　　弃上清，加入250ul TIANGEN质粒小提Kits(Cat# DP103-03，Lot# 6123)P1液，震荡，彻底混匀。

　　加入250ul P2液，温和(以免DNA断裂)翻转6-8次，使菌体充分裂解。（这一步总时间不要超过5min，防止过度裂解，质粒受到破坏）

　　向EP管中加入350ul P3液，立即温和上下翻转6-8次，充分混匀，此时可看到白色絮状沉淀，离心机12000rpm，离心3min。（P3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀，若上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清）

　　将吸附柱CP3(实验前用平衡液BL处理吸附柱可最大限度激活硅基质膜，提高得率；BL处理过的吸附柱最好当天使用，放置时间过长会影响效果)放在收集管中，将上清转移到吸附柱CP3中，尽量不要吸到沉淀，离心机12000rpm，离心30-60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管。

　　可选步骤：向CP3中加入500ul去蛋白液PD，12000rpm，离心30-60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管。（如果宿主菌是end A+ 宿主菌TG1、BL21、HB101、JM系列、ET12567等，因其含有大量核酸酶，所以推荐此步骤；若为end A- 宿主菌DH5α、TOP10等，可省略此步）

　　向CP3中加入600ul 漂洗液PW(已加入无水乙醇)，12000rpm，离心30-60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管。

　　重复步骤9。

　　离心机12000rpm，离心2min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去掉。

　　将CP3吸附柱放入一个干净的1.5ml EP管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100ul洗脱液EB，室温放置2min，12000rpm，离心2min，将质粒溶液收集到EP管中。（为增加质粒得率，可将溶液再次加入吸附柱CP3，室温放置2min，12000rpm，离心2min，将质粒溶液收集到EP管中；也可以提前65-70℃预热EB液）

　　测浓度，跑胶看提取质粒的质量。

　　二.质粒大提,操作这一步前一般要质粒小提确认质粒的质量。

　　取洁净的锥形瓶，加入小提步骤1中的LB液体培养基100ml，取小提步骤2中的菌液10ul 加入锥形瓶中，30℃，180rpm，摇过夜，以看到液体培养基变浑浊为准。

　　保存菌种：用15%的甘油保存菌种：1.5ml EP管中加入350ul 菌液+150ul 50%甘，混匀，-80℃保存。

　　将锥形瓶中剩下的菌液用50ml 离心管，4℃，8000rpm，离心5min，收集菌体沉淀，可同管多次。

　　根据所选大提试剂盒的说明书按步骤提取，不同试剂盒步骤不一样。

　　提取结束后测浓度，跑胶（因质粒分子量一般较大，所以用低浓度的琼脂糖胶和大的marker）

　　以上就是关于离心机在质粒DNA提取中的应用总结，如果您还想了解更多有关产品的应用信息，可多多关注上海卢湘仪离心机仪器有限公司。