一、原理1.超氧化物歧化酶(SOD)超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)是一种能专一地清除超氧离子自由基()的金属酶,它具有抗衰老、抗辐射、抗炎及抗癌等作用因而在医药、化妆品及食品工业等方面有了广泛的应用前景。

   SOD是一种酸性蛋白,对热、pH和蛋白酶的水解较一般酶稳定。按照它所含金属离子的不同,可分为Cu-Zn-SOD(二聚体,蓝绿色)、Mn-SOD(紫红色)和Fe-SOD(黄褐色)三种。SOD催化下述反应:2+2→+。机体内的过量和不足均对机体不利,SOD对过量的的及时清除保证了机体内的含量相对的平衡。机体内的形成可分为生理性和病理性两方面。

在一些正常生理过程中会形成一些。例如:呼吸链中电子传递结果可产生一些。在某些疾病(如氩中毒、辐射病等)过程中会产生大量的。过量的如不及时清除,会对细胞损伤。SOD将歧化为和,而过氧化氢(物)酶、谷胱甘肽过氧化酶可催化或氧化氢分解,在机体内形成一套解毒系统,对机体起防护作用。

   原理2.有机溶剂沉淀法分离纯化蛋白质本实验采用有机溶剂沉淀法以新鲜猪血为原料,从中提取SOD并进行分离纯化。

二、操作步骤

1.SOD的提取

[1]取新鲜猪血200ml于500ml离心管,6000r/min,10min离心,去上层血浆,取下层红血球粘稠液,然后加入2倍体积的0.9%NaCl溶液清洗,6000r/min,10min离心,弃上层清液,再加入2倍体积的0.9%NaCl溶液重复清洗一次,6000r/min,10min离心,得洗净的红血球粘稠液。

[2]向洗净的红血球中加入等体积的蒸馏水,剧烈搅拌30min,使其充分溶血。再向溶血液中缓慢加入预冷的0.25倍体积的95%乙醇溶液和0.15倍体积的氯仿,匀浆呈暗红色,再继续搅拌15min,4000r/min,10min离心,去变性蛋白沉淀物,得上层液,留样500ul(样1)。然后将清液在65-70℃恒温水浴中进行热处理,15min后取出迅速冷却到室温,4000r/min,5min离心除去沉淀,得浅黄色粗酶液,留样500ul。

[3]向粗酶液中加入等体积的丙酮溶液,冰箱静置过夜,6000r/min,10min弃上清液,得沉淀。将沉淀物用等体积预冷的丙酮溶液清洗两次,离心收集沉淀,自然干燥即得淡绿色成品,溶于30ml蒸馏水,备用。

      本次来自上海某制药厂的负责人在完成提取超氧化物歧化酶的实验后，对实验所获取的成果表示非常满意，更对我们上海卢湘仪生产的DL-8M大容量冷冻离心机以及服务表示赞赏，愿意与上海卢湘仪离心机仪器有限公司保持长期合作关系。上海卢湘仪总经理李桂梅表示愿意为国内制药行业的发展尽一份绵薄之力，更感谢上海某制药厂对卢湘仪离心机产品的信任与支持，我们将会持之以恒地为贵厂提供最优质的离心机产品与服务。